+ ESPERMOGRAMA COMPLETO CON MORFOLOGÍA DE KRUGER

El espermograma básico se indica para control o seguimiento de un paciente, por sí solo no puede ser utilizado para diagnóstico ni evaluación del potencial de fertilidad; acompañado de una evaluación de Morfología espermática o algún test mas específico ya sea estructural o funcional.

+ Técnicas de Recuperación espermática o evaluación funcional espermatica

• Gradiente de Densidad
• Swim Up
• Lavado de muestra y concentración Estas técnicas de mejoramiento espermático se utilizan como diagnóstico para observar, de manera previa, cómo respondería la muestra al procesamiento para una Inseminación Intrauterina o una Fertilización Asistida de Alta complejidad (ya sea F.I.V o I.C.S.I)

+ Test Inmunológico directo - Mar Test

Se basa en la presencia de partículas cubiertas con anticuerpos incompletos, generalmente isotipo IgG, que mezclados con espermatozoides sin lavar y con el agregado de antiinmunoglobulina humana, en exceso, produce aglutinados. Se cuentan como positivos los espermatozoides móviles que presentan partículas pegadas en su superficie.

+ Test Hiposmótico - HOST

Evalúa la integridad funcional de la membrana de los espermatozoides a través del sometimiento de los mismos a estrés hiposmótico. La técnica se basa en la capacidad del espermatozoide maduro normal, de hincharse en una solución hiposmótica. Valores de referencia: >60% de espermatozoides reactivos.

+ Evaluación de la Fragmentación de ADN espermático – Técnica de TUNEL por fluorescencia y CASPASA 3 Activa.

Terminal deoxi nucleotidyl Uriidin trifosfato (dUDT) deoxynucleotidil transferase Nick End- Labeling assay. El clivaje del DNA genómico durante la apoptosis o fragmentación del DNA puede producir dobles cadenas, fragmentos de bajo peso molecular de DNA o simples cadenas rotas (nicks) los que pueden ser identificados por la incorporación de nucleótidos marcados con fluoresceína (deoxiuridin trifosfato - dUDT) al extremo 3´terminal por una reacción catalizada por la deoxynucleotidiltransferasa (TdT). (Gorzcyca, 1993).

+ INDICACIONES CLÍNICAS

Fracaso en ICSI. Abortos a repetición
Otras indicaciones: varicocele, exposición a tóxicos ambientales, necrozoospermias. En la actualidad este tipo de evaluación se realiza de rutina en todos los pacientes que comiencen un tratamiento de fertilidad; debido a que ningún parámetro espermático corelaciona con el daño espermático.

+ Columnas de Anexinas V – Selección espermática para tratamientos de Fertilidad

Esta técnica de filtrado espermático se utiliza en pacientes con muestras alteradas en sus niveles de ADN fragmentado (TUNEL >20%). Permitiendo así obtener muestras procesadas enriquecidas de espermatozoides con material genético normal. Cuando los espermatozoides entran en Apoptosis externalizan en su membrana una proteína llamada Fosfatidil Serina; esta proteína se adhiere a Anexina V. Utilizando un complejo de Anexina V con una perla de Acero es posible el filtrado magnético a traves de estas columnas.

+ Recuperación de Espermatozoides en Orina

Esta evaluación se indica en pacientes que presentan potencialmente retroeyaculación. La presencia de Espermatozoides en Orina puede indicar que éstos retoceden a la vejiga en lugar de ser expulsados durante la eyaculación (eyaculación retrógrada)

+ MOST (Stress Test Modificado)

La pérdida de la movilidad espermática está asociada con el envejecimiento de las gametas y la peroxidación lipídica endógena. Este test estudia la movilidad post swim up o percoll y se lo ha relacionado con una peroxidación lipídica forzada. El MOST permite predecir fertilización y correlaciona significativamente con anormalidades relacionadas a las gametas masculinas. El MOST estima la resistencia de los espermatozoides a la lipoperoxidación. Este ensayo funcional mide los cambios en la movilidad espermática luego de incubar los espermatozoides móviles, obtenidos post swim-up/Gradiente de densidad, a temperatura de 40°C durante 4 hs. El MOST permite además predecir fallas de la fertilización de origen espermático sobre ovocitos humanos y se aplica en prácticas de reproducción asistida. El valor de corte del ensayo MOST se estableció en 0,48 porque presenta índices máximos de sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivos y negativos de la prueba. Los niveles bajos de MOST (< 0,48) reflejan un aumento de la Peroxidación Lipídica que altera la capacidad fertilizante del varón.-

+ Microccopía Electrónica de Espermatozoides

Las alteraciones morfológicas de los espermatozoides con frecuencia son responsables de la infertilidad masculina. La utilización de la microscopía electrónica nos permite observar la morfología aumentando a mas de 50 mil veces lo observado en una morfología de Kruger convencional; pudiendo de esta manera detectar anormalidades espermáticas para su diagnostico.